真实的国产乱XXXX在线,国产三级久久久精品麻豆三级,少妇高潮久久久久久,亚洲精品国产成人

歡迎您,來到賽諾利康生物技術(北京)有限公司!

返回首頁|在線留言|聯(lián)系我們

服務熱線:

86-010-80765002

您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術文章 > 單層培養(yǎng)傳代步驟
產品列表

單層培養(yǎng)傳代步驟

更新時間:2020-06-02   點擊次數(shù):2539次
 絕大多數(shù)有限細胞系及連續(xù)細胞系在體外進行原代培養(yǎng)時都是貼壁生長的,培養(yǎng)的細胞一經接觸培養(yǎng)基質就迅速鋪展并開始有絲分裂,逐漸形成致密的細胞單層,這種培養(yǎng)方式稱為單層細胞培養(yǎng)。
 
單層培養(yǎng)的細胞系在進行原代培養(yǎng)時,隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞的不斷分裂,一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面由于營養(yǎng)物質消耗殆盡、代謝廢棄物不斷積累,導致細胞停止生長甚至死亡。此時,為獲得大量的、穩(wěn)定的同種細胞,并保證細胞始終維持快速生長,可以將單層細胞從培養(yǎng)基質上分離下來制成單細胞懸液,按照推薦濃度接種到若干個新的培養(yǎng)器皿內繼續(xù)培養(yǎng),這個過程就稱為傳代(Passage)或再培養(yǎng)(Subculture)。
 
單層細胞傳代培養(yǎng),需要將細胞間及細胞與培養(yǎng)基質之間的連接打斷。對于某一些松散貼壁的細胞類型,只需輕敲培養(yǎng)器皿側面,細胞就會脫離下來。絕大多數(shù)貼壁細胞需要使用蛋白水解酶例如,trypsin/EDTA消化破壞上述連接。還有少數(shù)細胞需要使用機械力,例如使用細胞刮,使細胞分離下來。對單層培養(yǎng)而言,細胞生長接近指數(shù)生長期末時(大約70%-90%匯合),即可進行傳代。一般生長穩(wěn)定的細胞4~7天傳代一次。
 
單層培養(yǎng)傳代步驟:
 
1. 事先將培養(yǎng)基、Trypsin-EDTA溶液、Trypsin中和液、DPBS在室溫平衡,并準備若干已包被好poly-L-lysine或Fibronectin等的培養(yǎng)器皿。
 
注:不推薦使用37℃水浴鍋對上述溶液進行平衡。
 
2. 將長滿細胞的培養(yǎng)器皿中原有培養(yǎng)液吸棄,DPBS洗滌細胞1-2次。
 
3. 加入適量(略蓋過細胞即可)Trypsin-EDTA溶液室溫孵育0.5-2 min,不定時在顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),直至約80%細胞收縮、變圓突起(round up),立即加入等體積Trypsin中和液終止消化。
 
注:不同類型細胞消化時間長短不一,佳消化時間需自行摸索。
 
4. 輕輕晃動培養(yǎng)容器使細胞脫離,并將消化下來的細胞收集、轉移到離心管內。另取適量*培養(yǎng)基潤洗培養(yǎng)容器,將殘留的細胞一并轉移至離心管。
 
注:細胞收集完畢后,可以在顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器內還有多少細胞殘留(通常應少于5%),以此判斷細胞收獲是否*。 
 
5. 將收獲的細胞懸液于1000rpm下離心5min,棄上清,然后用適量*培養(yǎng)基重懸細胞。
 
6. 計數(shù)細胞,然后根據(jù)推薦的接種密度重新接種到新的已包被好的培養(yǎng)皿內。將培養(yǎng)器皿置于37℃, 5% CO2/95% air培養(yǎng)箱培養(yǎng),視細胞生長情況,每隔2-3天換一次液,詳見datasheet。
 
注:有限細胞系的增殖速率較低,其原代培養(yǎng)通常以1:1,1:2或1:3的比例進行傳代,但是對于增殖速率很高的連續(xù)細胞系(或無限細胞系),通常要以更高的比例進行傳代。
在線客服 聯(lián)系方式 二維碼

服務熱線

13911051536

掃一掃,關注我們

中文文字乱码一二三四| 精品人妻一区二区三区| 羞羞漫画_成人漫画_成人专用| 久久天天躁狠狠躁夜夜AV| 日韩精品无码熟人妻视频| 波多野结衣人妻| 人人妻人人澡人人爽欧美一区九九| 国产精品无码专区AV在线播放| 偷窥学校女厕撒尿bbbbb| 亚洲欧洲国产综合AV无码久久| 草草影院永久线路CCYY| 精国产品一区二区三区a片| 阿娇跪下吃j8图片| 久久久久亚洲精品无码蜜桃| 警察被两个混混脱裤玩j视频| 日产国产亚洲精品系列p| 国精品无码人妻一区二区三区| 精品国产麻豆免费人成网站| 母亲5免费完整高清电视| 蜜臀av国产精品久久久久| 人妻が夫の前寝取混浴温泉| 亚洲熟妇无码久久精品| 亚洲精品天堂成人片AV在线播放| 欧美大荫蒂毛茸茸视频| 国模啪啪久久久久久久| 小浪货好大的奶好爽| 亚洲一线产区二线产区区| 国产AV一区二区精品凹凸| 国产精品亚洲一区二区无码| 又圆又大的奶越摸越大| 国产农村熟妇videos| 领导每月都要玩我几次怎么办| 欧美午夜精品久久久久久浪潮| 国内精品伊人久久久久AV影院| 久久国产成人精品国产成人亚洲 | 蜜臀av夜夜澡人人爽人人| 国产欧美日韩精品丝袜高跟鞋| 日韩精品人妻系列无码专区| 最近中文字幕免费MV视频| 免费无码一区二区三区蜜桃| 公与淑婷厨房猛烈进出|